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小鼠ELISA試劑盒操作步驟及實(shí)驗(yàn)提醒

更新時(shí)間:2024-03-21    點(diǎn)擊次數(shù):2399

  小鼠ELISA試劑盒操作步驟及實(shí)驗(yàn)提醒

 

  小鼠ELISA試劑盒操作步驟:

  1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;。

  2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

  3. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑100μl,空白孔除外。

  4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。

  5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

  6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

  7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

  8. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

  9. 測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

  實(shí)驗(yàn)提醒:

  1、混合蛋白溶液時(shí),避免起泡。

  2、加校準(zhǔn)品與樣本時(shí),每個(gè)校準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭,公共組分應(yīng)該懸臂加樣,避免交叉污染。

  3、合適的溫育時(shí)間,和充分的洗滌步驟,是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。

  4、底物溶液為無(wú)色液體,保存過(guò)程中變?yōu)樗{(lán)色,代表底物溶液已經(jīng)失效,不得使用。

  5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致,加入終止液后,藍(lán)色底物產(chǎn)物,會(huì)瞬間變?yōu)辄S色。

  6、實(shí)驗(yàn)中,用剩的板條,應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

  7、所有液體組分,使用前充分搖勻,嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)標(biāo)明的時(shí)間、加樣量及加樣順序進(jìn)行溫育操作。

  8、檢測(cè)必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定,嚴(yán)格防止交叉污染,所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。

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