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對于ELISA試劑盒變質(zhì)的原因您知道多少?
在ELISA實驗中我們經(jīng)常會碰到試劑盒變質(zhì)的問題,是什么原因?qū)е铝薊LISA試劑盒的變質(zhì)呢?接下來BUNSEN本生就和大家說一說導致ELISA試劑盒變質(zhì)的原因有哪些。
導致ELISA試劑盒變質(zhì)的原因主要分為七種:
1、方法學的影響
ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的平競爭等因素的影響,結(jié)果重復性較差,質(zhì)量較難控制。
2、試劑因素
不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難bao證質(zhì)量一致,即使是通過批檢的項目其檢測結(jié)果也會存在差異,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,并bao證保存條件。 嚴格執(zhí)行這一標準可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復雜過程,并且能夠bao證結(jié)果的穩(wěn)定性;對于效期短、使用率低的試劑,應當小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復凍融造成試劑的失效。
3、樣本因素
標本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,者包括類風濕因子、補體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等,后者包括標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時間過長、標本凝固不全、冷凍標本的反復凍融等。
4、操作因素
ELISA操作步驟復雜,操作不當將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。
5、灰區(qū)的設置
通常情況下,ELISA定性實驗以“陽性”和“陰性”來報告結(jié)果,兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”(cut-off value,CO值),這是定性免疫測定結(jié)果報告的依據(jù)。
6、標本復查
ELISA手工檢測過程復雜,影響因素較多,即使室內(nèi)質(zhì)控在控,也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異,因此加大復查力度是bao證結(jié)果準確性的可靠方法。
7、表示結(jié)果的常用方法
?、?定性測定。
?、?半定量測定,結(jié)果一般以滴度表示。
?、?定量測定,即用已知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA測定,繪制標準曲線,結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應板都必須繪制相應的標準曲線。
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