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血清必須熱滅活嗎、對此BUNSEN帶您了解相關(guān)疑問!
血清熱滅活是許多細(xì)胞培養(yǎng)者探討的話題,許多科研的小伙伴拿到一瓶全新的血清,總會猶豫血清究竟要不要進(jìn)行滅活處理、血清滅活要怎樣操作、在什么情況下要對血清進(jìn)行滅活等等,關(guān)于這些疑問,BUNSEN本生技術(shù)小編今天就為大家做一個詳細(xì)的解答。
一、什么是熱滅活?
一般情況下,血清的熱滅活是在血清全部解凍后,置于56℃水浴中30分鐘進(jìn)行處理。如果為了更好的保留血清的營養(yǎng)成分,減少熱滅活對血清的損傷,可以將血清置于40℃水浴中20分鐘進(jìn)行熱滅活。
二、血清為什么要熱滅活?
很多人認(rèn)為,血清熱滅活是為了消滅血清中的細(xì)菌、病毒等微生物,其實不然,一瓶合格的血清,在生產(chǎn)過程中,會嚴(yán)格把控血清中微生物的指標(biāo)。一般情況下,用戶買到的血清,都是無菌的,可以在解凍后直接進(jìn)行使用。
對血清進(jìn)行熱滅活處理,實際是為了使血清中的補(bǔ)體失活。補(bǔ)體是一種血清蛋白質(zhì),存在于人和脊椎動物血清及組織液中,不耐熱,活化后具有酶活性、可介導(dǎo)免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)??杀豢乖?抗體復(fù)合物或微生物所激活,導(dǎo)致病原微生物裂解或被吞噬。
三、胎牛血清需要滅活嗎?
胎牛血清是來自未分娩的胎牛,經(jīng)心臟穿刺采血,后經(jīng)其他步驟制備而來的。這個階段的血清中,未形成完整的補(bǔ)體系統(tǒng),不會真正的干預(yù)免疫。胎牛血清中含有諸如生長因子、維生素、氨基酸等珍貴物質(zhì),將血清置于56℃水浴30分鐘,會導(dǎo)致這些珍貴的營養(yǎng)物質(zhì)流失,對血清造成不小的傷害,所以一般情況下,胎牛血清不需要熱滅活處理。
四、什么情況下需要熱滅活處理血清?
當(dāng)實驗涉及以下情況時,建議去除血清可能帶來的補(bǔ)體系統(tǒng)的干擾:
1、誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞分化
2、免疫學(xué)研究
3、培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞
4、其他補(bǔ)體參與的細(xì)胞培養(yǎng)過程
5、利用昆蟲細(xì)胞研究病毒感染
因此,當(dāng)涉及到一些對補(bǔ)體比較敏感的實驗,并且血清中補(bǔ)體濃度相對比較高,可能存在對實驗的影響時,需要考慮對血清進(jìn)行熱滅活。
五、血清熱滅活為什么會產(chǎn)生大量沉淀?
1、血清滅活后出現(xiàn)的沉淀大多數(shù)是纖維蛋白析出,屬正?,F(xiàn)象。滅活過程中,多次搖晃血清,使血清受熱均勻可以降低蛋白的析出。
2、當(dāng)血清在未解凍狀態(tài)時,直接置于56℃水浴,滅活過程中血清局部受熱溫度過高,加熱時間過長就會產(chǎn)生膠狀沉淀,這樣的血清質(zhì)量嚴(yán)重受損,是無法繼續(xù)正常使用的。
總之,多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的。很多場合下,熱滅活并不會改善細(xì)胞的生長,卻降低了支持細(xì)胞生長的能力。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下,其促進(jìn)的比率也是微不足道的。另外,血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物的污染,從而給用戶和供應(yīng)商都帶來不必要的麻煩。我們建議,對于那些對血清進(jìn)行滅活的用戶,需要通過試驗來證實其必要性,確定滅活的適當(dāng)條件;在滅活過程中,需要嚴(yán)格認(rèn)真監(jiān)測,并選擇一個可重復(fù)的方案進(jìn)行操作。
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